ELISA試劑盒的作用
ELISA試劑盒的作用:
①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)
②酶標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物)
③酶作用的底物(顯色劑) 測(cè)量時(shí),抗原(抗體)先結(jié)合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然后加一種抗體(抗原)與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標(biāo)記物),此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應(yīng)結(jié)合后,再加上酶的相應(yīng)底物,即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。 其所生成的顏色深淺與欲測(cè)的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(jì)(酶標(biāo)儀)加以測(cè)定。其方法簡(jiǎn)單,方便訊速,特異性強(qiáng)。 分類 該法由種類和變化可分為以下幾種:
ELISA試劑盒(一)雙抗體夾心法
(二)間接法
(三)競(jìng)爭(zhēng)法
(四)雙位點(diǎn)一步法
(五)捕獲法測(cè)IgM抗體
(六)應(yīng)用親和素和的ELISA
ELISA試劑盒包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優(yōu)化 1、包被緩沖液的優(yōu)化 包被抗原時(shí),為了得到的包被效果,我們采用了碳酸鹽緩沖液(50mM ph9.6 )、磷酸鹽緩沖液(50mM ph7.6)、以及TRIS鹽酸緩沖液(50 mM ph7.6)三種緩沖液作為包被液,抗原包被濃度為5ug/ml,及2.5ug/ml,酶標(biāo)抗體工作濃度為1:400及1:300,用自動(dòng)酶標(biāo)儀分析,選擇的包被緩沖液系統(tǒng)。