實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
急性髓性白血病細胞；KG-1a | 貼壁生長 | EY-X63456 |
?
細胞名稱 急性髓性白血病細胞；KG-1a
形態(tài)特性: 骨髓瘤細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yǎng)條件: IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium新生牛血清，20%
傳代方法: 2x10-5細胞/ml
傳代情況:
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
rpIFN-g (50 UG)細胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細胞；PA317 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)胎牛血清，10%
rpIFN-a (100000 UN)細胞名稱: 小鼠結締組織L細胞株929克??；L-929[L929] MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)馬血清，10%
rPhos TrkA Cell-Based ELISA (1 KT)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞；WEHI231 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質胎牛血清，10%；0.05mMβ-巰基乙醇
rPhos TH Aff Pur PAb (100 UL)細胞名稱: 小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14；MC3T3-E1Subclone14 α－MEM：AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)優(yōu)質胎牛血清，10%
rphHeparinase III, CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠顱蓋成纖維細胞；OP9 α－MEM：AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)優(yōu)質胎牛血清，20%
rphHeparinase II, CF細胞名稱: 小鼠胚胎干細胞；ES-D3(CRL-1934) 干細胞培養(yǎng)基
rpGM-CSF, CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠腎上腺皮質細胞；Y1 優(yōu)質胎牛血清，10%
rpGM-CSF (10 UG)細胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細胞；C3H/10T1/2,Clone8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質胎牛血清，10%
rpEndoglin, CF (25 UG)細胞名稱: SV40轉化的非洲綠猴腎細胞；COS-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
rPDGF-AA MAb (Cl 184805) (500 UG)細胞名稱: 牛胚氣管細胞；EBTr(NBL-4) MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清，10%
rPDGF-AA Biot Aff Pur PAb (50 UG)細胞名稱: 恒河猴腎細胞；LLC-MK2 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清，10%
rPDGF-AA Aff Pur PAb (100 UG)細胞名稱: 牛腎細胞；MDBK RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清，10%
rpCD31 (PECAM-1), CF (50 UG)細胞名稱: EB病轉化的絨猴淋巴細胞；B95-8 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
rPBEF Aff Pur PAb細胞名稱: 非洲綠猴腎細胞；VERO MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清，10%
rNXRN1b Biot Aff Pur PAb (50 UG)細胞名稱: 猴脈絡膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞；RF/6A RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清，10%
rNXRN1b Aff Pur PAb (100 UG)細胞名稱: 非洲綠猴腎細胞；CV-1 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
急性髓性白血病細胞；KG-1a人硫角質素(KS)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫類肝素(HS)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫皮膚素(DS)ELISA試劑盒LPSELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫軟骨素(CS)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人尿游離(UFC)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人葡萄糖6磷異構酶(GPI)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人前列環(huán)素(PGI)ELISA試劑盒Lp-αELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人鞘磷脂(SM)ELISA試劑盒Lp-αELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
點擊放大
