白介素1βELISA試劑盒廣泛應用于臨床和科研領域
白介素1β(IL-1β)是一種重要的炎癥細胞因子,在多種炎癥和免疫反應中發(fā)揮關鍵作用。IL-1β的水平變化可以反映炎癥反應的強度,因此其檢測對于疾病診斷、治療監(jiān)測和基礎研究具有重要意義。白介素1βELISA試劑盒作為一種高靈敏度、高特異性的檢測工具,廣泛應用于臨床和科研領域。
一、原理:
1.預包被與樣本捕獲:將特異性抗IL-1β單克隆抗體固定于酶標板孔中,樣本中的IL-1β通過抗原-抗體反應被捕獲。
2.酶標記系統(tǒng):加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗,與捕獲的IL-1β形成“抗體-抗原-抗體”夾心結構。
3.顯色反應:加入顯色底物TMB,HRP催化TMB顯色,顏色的深淺與IL-1β的濃度成正比。
4.結果測定:通過酶標儀在450nm波長處測量各孔的吸光度(OD值),根據(jù)標準曲線計算樣本中IL-1β的濃度。
二、白介素1βELISA試劑盒的應用領域
1.感染性疾?。篒L-1β水平與肺損傷程度呈正相關。例如,武漢協(xié)和醫(yī)院的研究發(fā)現(xiàn),IL-1β>50pg/ml的患者更易發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS),為臨床干預提供早期預警指標。
2.自身免疫?。侯愶L濕關節(jié)炎患者滑膜液中IL-1β濃度可達正常值的200倍。通過定期檢測,醫(yī)生可動態(tài)評估疾病活動度,指導生物制劑(如IL-1受體拮抗劑)的精準用藥。
3.腫瘤免疫:在PD-1抑制劑治療中,IL-1β水平變化可預測免疫相關不良反應(irAE)。北京大學腫瘤醫(yī)院的數(shù)據(jù)顯示,治療第3周IL-1β升高>3倍的患者,發(fā)生結腸炎的風險增加4.7倍。
三、白介素1βELISA試劑盒的操作步驟
1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2.溫育:酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
3.洗滌:棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.加辣根過氧化物酶標記親和素:每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μl,37℃溫育60分鐘。
5.顯色:依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內)。
6.終止:依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
7.測定:用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
四、白介素1βELISA試劑盒的性能特點
1.高靈敏度:試劑盒的靈敏度可達2.2pg/ml,能夠檢測到單核細胞激活后釋放的微量細胞因子。
2.高特異性:通過抗體篩選技術,試劑盒能夠精準區(qū)分IL-1家族成員,與人IL-1α、IL-1sRII等蛋白的交叉反應率低于0.1%。
3.動態(tài)范圍廣:檢測上限可提升至1000pg/ml,覆蓋從基礎分泌到病理爆發(fā)的全濃度范圍。
4.操作簡便:試劑盒采用預包被抗體和即用型試劑,簡化了操作步驟,減少了人為誤差。
總之,白介素1βELISA試劑盒作為一種高靈敏度、高特異性的檢測工具,在炎癥和免疫研究中發(fā)揮著重要作用。其不斷優(yōu)化的性能和便捷的操作步驟,使其在臨床診斷和科研應用中具有廣闊的發(fā)展前景。
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